Stanovení Peanut ELISA je určeno pro kvantitativní stanovení arašídových
proteinů v potravinách, i tepelně opracovaných.
Soupravou je možné stanovit až 41 / 17 vzorků v duplikátech (96 jamková
mikrotitrační destička / 48 jamková mikrotitrační destička).
|
Čas
potřebný pro přípravu a extrakci: |
1
hod (10 vzorků) |
|
Čas
potřebný pro ELISA stanovení: |
2
hod 10 min |
|
Limit detekce (LOD): |
0,011 mg/kg (ppm) |
|
Limit kvantifikace (LOQ): |
0,036 mg/kg (ppm) |
|
Rozsah kalibrační křivky: |
0,1
- 3 mg/kg (ppm) |
Podzemnice olejná (Arachis apogea) patří do čeledi bobovité (Fabaceae). Alergie
na arašídy je významná, protože jako jedna z mála alergenních potravin způsobuje
závažné alergické reakce, které mohou vést až k anafylaktickému šoku. Prevalence
alergie na arašídy se uvádí v Anglii a USA mezi 0,5 – 1 % . Prevalence u malých
dětí bývá přibližně o 0,2 % vyšší než u dospělých, ale obecně tato alergie spíše
v dospělosti přetrvává.
Nejdůležitější alergeny jsou uvedeny v tab. 1. Molekulová hmotnost
nejvýznamnějšího alergenu arašídů proteinu Ara h 1 ( viz obr. 1) je 63 kDa. Ara
h 1 tvoří velmi stabilní homotrimer. Monomery jsou vázané hydrofobními
interakcemi. Většina IgE vazebných epitopů je lokalizována v oblasti distálního
konce trojrozměrné struktury u vazby monomer-monomer, čímž mohou být chráněny
vůči trávení. Ačkoli typické prahové dávky způsobující alergické reakce se
pohybují v rozmezí 100-1000 mg arašídového proteinu, u některých citlivých
pacientů můžou reakci vyvolat velmi nízké dávky okolo 100 μg arašídového
proteinu.
Imunoenzymatické stanovení proteinů arašídů je stanovení sendvičového typu,
které probíhá ve dvou imunologických krocích a je založeno na specifické
interakci polyklonální protilátky s proteiny arašídů. Do jamek pokrytých králičí
protilátkou č. 2 proti proteinům arašídů se přidá extrakt vzorku/kalibrátory,
kde se během první inkubace naváží arašídové proteiny ze vzorku/kalibrátorů na
protilátku na stěnách jamky mikrotitrační destičky. Po promytí se do jamek přidá
konjugát králičí protilátky č. 2 proti proteinům arašídů s křenovou peroxidázou,
který se při druhé inkubaci prostřednictvím komplexu protilátky s antigenem
naváže na pevnou fázi. Po inkubaci se jamky promyjí a na jamkách navázaná
peroxidáza je detekována přídavkem chromogenního substrátu
(tetramethylbenzidin). Intenzita vzniklého zabarvení je přímo úměrná koncentraci
arašídových proteinů v kalibrátorech, kontrolních vzorcích a extraktech vzorků.
